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組織培養(yǎng)-無菌室操作規(guī)程

更新時(shí)間:2017-05-18   點(diǎn)擊次數(shù):1908次

1. 無菌室室內(nèi)溫度保持在20-24℃,濕度保持在45-60%;室內(nèi)應(yīng)保持清潔,嚴(yán)禁堆放雜物,以防污染;
2. 無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液,如75%的酒精,0.1%的新潔爾滅溶液,優(yōu)氯凈,碘伏等等;無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔,以保證無菌室的潔凈度符合要求;
3. 需要帶入無菌室使用的器械,玻璃器皿等一切物品,均應(yīng)包扎嚴(yán)密,并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌(一般采用高溫高壓滅菌,1.2個(gè)大氣壓,121-126℃,30分鐘);
4. 工作人員進(jìn)入無菌室前,必須修剪指甲,用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在緩沖間更換工作服,鞋,帽子,口罩和手套(或用75%的乙醇再次擦拭雙手),方可進(jìn)入無菌室進(jìn)行操作;
手的清潔流程:
(1)取下手上的飾物及手表,調(diào)節(jié)合適的水流,浸濕雙手;
(2)取肥皂或適量肥皂液液涂抹雙手;
(3)按“六部洗手法”順序搓洗雙手:
①掌心對(duì)掌心,兩手并攏相互搓擦;
②手心對(duì)手背,手指交錯(cuò)相互搓擦(交換);
③掌心相對(duì),手指交叉沿指縫相互搓擦;
④用一只手握住另一只手拇指旋轉(zhuǎn)搓擦(交換);
⑤彎曲一手手指各關(guān)節(jié),在另一只手掌心旋轉(zhuǎn)搓擦(交換);
⑥指尖在掌心轉(zhuǎn)動(dòng)搓擦(交換);
(4)浸濕手的前臂部分(手腕至手肘),取肥皂或適量肥皂液液涂抹前臂,用手掌認(rèn)真搓擦(交換);
(5)流水沖洗,腕部略高于肘部,使污水從指尖流至手腕,防止水流入衣袖。
5. 無菌室使用前須用75%的乙醇擦拭超凈工作臺(tái)臺(tái)面及四周,必須打開無菌室的紫外燈滅菌30分鐘以上,同步開啟臭氧消毒機(jī),輔助進(jìn)行臭氧消毒,同時(shí)打開超凈工作臺(tái)紫外燈并開啟風(fēng)扇按鈕進(jìn)行吹風(fēng)。紫外滅菌結(jié)束后,關(guān)閉紫外燈及臭氧消毒機(jī)30分鐘后才能進(jìn)入無菌室進(jìn)行操作;
6. 進(jìn)入超凈工作臺(tái)開始工作前,必須先開啟風(fēng)扇及工作燈,點(diǎn)燃酒精燈,用75%的乙醇認(rèn)真擦拭雙手,之后才能進(jìn)行工作;
7. 操作結(jié)束后,應(yīng)及時(shí)清理無菌室,進(jìn)行清掃:
①將使用過的操作工具及廢液缸從超凈工作臺(tái)上取出;
②先用碘伏消毒液擦拭超凈工作臺(tái)臺(tái)面及四周,再用75%的乙醇擦拭一遍,使其恢復(fù)成使用前狀態(tài);
③使用新吉爾滅液或碘伏消毒液進(jìn)行地板擦拭等清潔工作,再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。
④在緩沖間脫下工作服,帽子,口罩,放回原位,離開緩沖間換下鞋子,結(jié)束工作。
8. 供試品(培養(yǎng)基、母苗)及包扎好的其他物品在開啟前,應(yīng)保持外包裝完整,不得在超凈工作臺(tái)以外環(huán)境開啟,以防污染。開啟前,用75%的酒精棉球或消毒紗布認(rèn)真擦拭外表面;
9. *次進(jìn)行無菌操作前,應(yīng)做陰性空白對(duì)照,以檢查無菌操作、高壓滅菌、培養(yǎng)室的可靠性;后期陸續(xù)操作過程中,若出現(xiàn)大面積污染,則下一批次操作應(yīng)做陰性空白對(duì)照,以便查明污染原因;
10. 工作人員必須在每瓶分苗完畢的培養(yǎng)基瓶外做好標(biāo)記,標(biāo)記為“工作臺(tái)號(hào)+培養(yǎng)基批次”,如工作臺(tái)號(hào)為01,培養(yǎng)基批次為01,則標(biāo)記為“0101” ;
11. 工作過程中出現(xiàn)飲水、上廁所等情況暫時(shí)離開無菌室后,工作服等應(yīng)脫下并放置于隔離室衣帽架上,不得穿戴離開隔離室;再次進(jìn)入前須重復(fù)規(guī)程“4” 中的步驟;

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